瑞普生物开创中国猪瘟脾淋疫苗标准化生产新时代

猪瘟（CSF）是国际动物卫生组织（OIE）和中国的A类法定传染病之一，虽纳入我国重大动物疫病的强制性免疫体系，但仍是危害我国养猪业的“第一杀手”。据不完全统计，每年因疾病死亡的猪只数占猪总数的8％~10％，而其中1/3是由猪瘟引起的。目前，在我国猪瘟呈三个明显的流行特点：一是大规模暴发已不多见，多呈散发，免疫猪群以非典型猪瘟为主；二是猪群的隐性感染或带毒现象普遍存在；三是常与蓝耳病病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV2）等疾病呈二重或多重感染。我国猪瘟的防控策略，目前和今后很长一段时间仍然以疫苗免疫为主。而疫苗质量直接决定了猪瘟的防控效果。每年因疫苗质量问题导致免疫失败的现象屡见不鲜。当前，市场上应用的猪瘟疫苗主要有猪瘟脾淋苗和猪瘟细胞苗，其中细胞苗又包括牛睾丸细胞苗和ST传代细胞苗。无论哪种疫苗，生产用种毒均为猪瘟病毒兔化弱毒株（C株），该毒株的免疫原性、有效性和安全性已得到全球的广泛认可。猪瘟脾淋苗因其具有较好的免疫效果和保护率，深受广大养殖户的青睐，占有较大的市场份额，但由于脾淋苗受生产环境、家兔质量、生产工艺、内控指标等多种因素的影响，导致现有市场上猪瘟脾淋苗的质量参差不齐。因此，为了实现猪瘟脾淋苗标准化生产，加强猪瘟脾淋苗的生产环境、家兔质量、生产工艺、病毒含量、纯净性等方面的研究势在必行。瑞普(保定)生物药业有限公司以猪瘟脾淋苗质量标准化为科研课题，就生产及检验用兔的标准、生产环境、生产流程、关键工艺及质控体系等方面进行了潜心研究，在国内首次采用流水线式脾淋抗原采集工艺，建成了工艺先进、产能最大的猪瘟脾淋苗GMP生产车间，创建了猪瘟脾淋苗生产的“4S（标准化）”模式，保证了猪瘟脾淋苗质量的批内一致、批间稳定，彻底解决了猪瘟脾淋苗生产流程难以标准化的问题，开创了中国猪瘟脾淋疫苗标准化生产的新时代！瑞普生物猪瘟脾淋苗4S模式包括标准化生产车间（GMP）、标准化生产用兔、标准化生产工艺(SOP)和标准化质控体系。
标准化生产车间（GMP）“工欲善其事，必先利其器”。为确保猪瘟脾淋苗的质量，瑞普（保定）生物药业有限公司严格按照兽药全面质量管理GMP要求，采用国内最先进的家兔饲养设施、流水线式脾淋抗原采集设备等，建成了国内面积最大、产能最大、生产设施最先进的猪瘟脾淋苗专用GMP生产车间，从硬件设施上保证了猪瘟脾淋疫苗生产标准化，年产猪瘟脾淋苗达1.26亿头份。家兔的饲养环境对产品质量至关重要。由公式R=（A+B+C）D±E（R:实验动物的总反应；A:动物种间的共同反应；B:动物品种，品系特有的反应；C:动物的个体反应；D:环境因素；E:实验误差）可知，饲养环境D对疫苗质量R至关重要。环境因素包括物理因素（温度、湿度、气流、光照、噪声、笼具、饲养密度等）、化学因素（饲料、饮水、空气、臭气（如氨气浓度）、杀虫剂、消毒剂等）、人为因素（主要是饲养管理程序）、生物因素（各种病原体包括细菌、病毒、寄生虫等）等，其中环境温度对家兔疫苗热反应影响较大，见表1。
表1环境温度对大耳白家兔定型热比率的影响

由表1可见，保持环境因素的稳定对生产高质量猪瘟脾淋苗至关重要。瑞普（保定）生物药业有限公司建成了国内最大的GMP标准化饲养兔舍，制定了标准化的饲养管理程序，实行全进全出制，防止其他病原菌的侵入，克服了环境因素对家兔猪瘟种毒热反应的影响。饲养环境条件见表2。
表2GMP家兔饲养环境

标准化生产用家兔
生产用家兔的质量是影响脾淋疫苗质量的重要因素之一。注射猪瘟种毒后家兔热型反应情况与家兔的来源、遗传背景、品种、日龄、健康情况、有无猪瘟抗体、体重等因素有密切的关系。
为了克服生产用家兔对疫苗品质的影响，瑞普生物根据30多年生产数据监测情况，制定了生产用家兔质量标准，见表3。
表3瑞普生物生产用家兔标准
标准化生产工艺（SOP）
瑞普生物优化猪瘟脾淋苗生产工艺流程，包括人性化的屠宰模式、两次体表消毒制度、链条悬挂式无菌脾淋采集模式、终端无害化处理制度等，规范了整个猪瘟脾淋苗的生产过程。严格按照标准操作规程生产，对生产环节的各个动作进行分解，每个人只做一个动作。在百级层流环境下，对经过两次消毒的家兔胴体进行悬挂式解剖，暴露内脏，几乎不和其他可能造成污染的部位接触，分开采集脾脏和淋巴，减少传统方式的剪镊碰触内脏，尤其是肠道破损而造成的污染；同时采集的脾淋组织采用冰镇方式，避免环境温度对抗原效价产生影响。整个过程完全在轨道上进行，大大提高了生产速度和效率，实现了标准化猪瘟脾淋苗生产工艺要求。
标准化质控体系
用不同剂量的猪瘟C株疫苗免疫猪，证实免疫剂量与保护水平密切相关。剂量不足时，攻毒后不能阻止强毒在体内的复制和带毒。合格疫苗每头份抗原含量应＞50PD50，即将疫苗50倍稀释免疫仍能保护50％。欧洲疫苗抗原含量标准≥100PD50，而我国规定脾淋组织疫苗的免疫剂量为150RID，折算为37PD50，这一剂量远远低于国际标准。
瑞普生物严格按照内控标准生产猪瘟脾淋疫苗（商品名：文易宁），每头份疫苗至少含有750RID（＞180PD50），只需注射一个剂量就足以抵抗亚临床感染。疫苗纯净，无细菌、支原体、外源病毒污染，在生产过程中只采集定型热家兔的脾脏和淋巴，采取组织捣碎和超声波破碎相结合的方式，充分的释放抗原。同时采用低温连续流离心纯化技术去除组织碎片，大大降低疫苗的副反应。
瑞普生物以全心服务于中国畜牧业的理念，建成了目前中国面积最大、设施最先进、产能最大的猪瘟脾淋疫苗专用GMP生产车间，采用国内首创流水线式的脾淋采集模式，打造出猪瘟脾淋苗“4S（标准化）产品”—“文易宁”，使之更安全、更高效、更纯净、更稳定、更均一，从而开创了中国猪瘟脾淋疫苗标准化生产新时代！