由致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢和白痢，目前在国内大多数养猪场广泛流行，发病率和死亡率因饲养管理水平的不同有很大的差别，临床上主要采用抗菌药物进行治疗，但是传统的抗菌药物治疗易产生耐药菌株，大大增加了临床选药的难度。还会破坏机体的正常菌群，导致机体内的微生态平衡被破坏，增加了机体对外源感染的敏感性。抗菌药的长期使用，还会导致药物残留，严重威胁着动物源性食品安全[1-2]。在我国用中草药治疗疾病具有悠久的历史，本实验选取来源广泛的中草药根据中兽医理论，以地锦草为主药组成6种组方进行体外抑菌试验，现将试验情况报告如下：
1 材料与方法
1.1 供试材料1.1.1 供试中药 地锦草、黄连、黄芩、黄柏、黄精、甘草、金银花、白头翁、马齿苋、秦皮、石榴皮、黄芪、葛根、金银花、诃子等均购自金华市医药公司。1.1.2 培养基 普通营养肉汤、普通营养琼脂、麦康凯营养琼脂（由北京奥博星生物技术责任有限公司生产）。1.1.3受试菌株 猪源致病性大肠杆菌O20、O48和O161来自金职院农学院动物微生物实验室，从临床患病仔猪尸体中分离经中监所鉴定并保存的优势菌株各1株。1.1.4主要仪器设备 煎药器、隔水式恒温培养箱、光学显微镜、超低温冰箱、数显恒温水浴锅、电子天平等等。1.2 方法1.2.1中药组方 组方Ⅰ：地锦草3份、白头翁2份、黄柏1.5份、黄连2份、秦皮为1.5份； 组方Ⅱ：地锦草3.5份、黄连 1.5份、黄芩 1.5份、黄柏 1.5份、 马齿苋2份； 组方Ⅲ：地锦草2份、黄精1.5份、马齿苋1.5份、粉葛1份、黄芩1份、白头翁1份、甘草0.5份、诃子1份、黄连0.5份； 组方Ⅳ：地锦草2.5份、黄精1.4份、穿心莲0.5份、白头翁0.7份、大青叶0.5份、黄芩0.5份、银花0.5份、连翘0.5份、甘草0.5份、黄柏1份、秦皮0.7份、黄连0.7份； 组方Ⅴ：地锦草3份、黄柏1.5份、黄连1.5份、黄精2份、石榴皮2份； 组方Ⅵ：地锦草4份、黄柏2份、黄连2份、黄精2份；1.2.2中药水煎剂的制备 每种方剂均按水提法进行制备，以组方Ⅰ为例，称取地锦草30g、白头翁20g、黄柏15g、黄连20g、秦皮15g，装入煎药器中，加1000 mL蒸馏水浸泡30min后，先用武火加热至沸后文火煎煮30min，用4层纱布过滤，滤出煎液，然后将药渣按上述方法再煎煮一次，合并两次滤液，滤纸过滤，恒温水浴加热浓缩至生药含量为1 g/mL，高压灭菌后，置4℃冰箱保存待用。1.2.3培养基制备 普通营养肉汤、普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基均按厂家说明书配制，4℃冰箱保存待用。1.2.4致病性大肠杆菌的培养 将菌种接种于麦康凯琼脂培养基上，37℃培养24h，挑取典型菌落接种于普通肉汤培养基中，置37℃培养24h后，取各菌液0.5 mL接种于普通营养琼脂平板上培养8～12h后，用L棒刮取菌苔，用灭菌生理盐水稀释至含菌量5×104～5×105 CFU/mL备用。1.2.5抑菌试验 最小抑菌浓度（MIC）测定,用试管二倍稀释法稍做改进。以组方Ⅰ为例，取灭菌试管10支，依次编号，每管先加入灭菌肉汤培养基1.0 mL，然后于第一管中加入制备好的中药水提液1.0 mL，混匀后取出1.0 mL放入第二管，依此类推至第9管，弃掉1mL，第10管不加药物，作为阳性对照，重复制备三套管，取一套重复管不加细菌稀释液用于阴性对照管，另二套重复管一套备用一套做重复实验用。取制备好的细菌稀释液0.1 mL分别加入上述1至10管中混匀，使第1管至第9管药物浓度（mg/mL）分别为500、250、125、62.50、31.25、15.60、7.80、3.90、1.95。置各管于恒温培养箱中37℃培养24h，观察结果。阳性对照细菌生长，呈均匀浑浊状，阴性对照管无细菌生长呈澄清、透明状时，试验成立，观察其它各管情况。1.2.6抑菌试验结果的判断
……
……
本文全文刊于本杂志2012年10月刊，可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章，作者：刘 少娟，如若转载，请注明出处：http://zgdwbj.com/archives/10669
