引言 弓形虫病是由刚地弓形虫( Toxoplasma gondii)引起的人畜共患原虫病，弓形虫病的传播和流行给畜牧业生产造成极大损失、主要以高热、呼吸困难、神经症状以及繁殖障碍为特征，猪弓形虫病常导致猪只流产、弱胎、死胎和高热、消瘦，暴发性流行时会导致动物大量死亡[1]。猪的弓形虫感染率高达3.32%~66.39%，患弓形虫病的猪及其肉制品往往是人类感染弓形虫病的重要传染源之一[2]。弓形虫的终末宿主是猫及猫科动物，中间宿主是各种哺乳动物和禽类，对养猫的家庭要定期进行弓形虫病检测，确保安全。 猪弓形虫的检测方法颇多。有病原学诊断和抗体诊断，病原学诊断常用的方法有直接观察法、动物接种试验法、PCR诊断方法以及应用SPA -ELISA法检测血清循环抗原[3-5]；在弓形虫病的流行病学监测中，常用的是检测弓形虫病的抗体检测，即血清学检测，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接血凝试验（IHA）、乳胶凝集试验（LAT）、改良凝集试验（MAT）、免疫金银染色法(IGSSA)、斑点免疫结合试验(DIBA)和免疫酶染色试验(1EST)等。国内多数学者和实验室检测弓形虫抗体常用的方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接血凝试验（IHA）[6-7]。但是不同方法的检测结果存在差异，统计的阳性率差异也较大[8]。因此，本文应用ELISA、IHA两种方法对同一批猪血清进行试验，旨在分析这两种方法检测猪弓形虫抗体的准确性和可靠性。
1材料与方法
1.1 材料 待检猪血清：龙岩市某猪场32份血清。1.2 试剂 猪弓形虫抗体检测试剂盒（酶联免疫吸附法），购置于深圳康百得公司，①酶结合物，生产批号：To 104118；②洗涤液，生产批号：010223N（10X）；③底物，生产批号：007329；④显色剂，生产批号：TMB 012421；⑤稀释液，生产批号：103502N；⑥终止液，生产批号：H2SO4 012630；⑦阳性血清，阴性血清。弓形虫间接血凝试验试剂盒，购置于中国农业科学院兰州兽医研究所，生产批号为20110329。1.3仪器设备 酶标仪，恒温箱（水浴锅），各种刻度的微量移液枪，96（12×8）孔1100V 形有机玻璃板，微型振荡器等。1.4检测方法1.4.1 ELISA试验按说明书操作（1）洗涤液配置：用蒸馏水或去离子水将试剂盒中浓缩洗涤液按1∶10稀释，充分混匀即为工作洗涤液。（2）样本稀释：用样本稀释液将待测猪血清按1∶100稀释，充分混匀。阳性、阴性对照品不用稀释，直接加样。（3）加样反应：每次试验阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔，分别加入阴性、阳性液及样本稀释液100μL。样本检测孔每孔加已稀释的血清样本100μL。37℃避光反应30min。甩去孔液体，每孔注满工作浓度稀释液洗涤3次，每次均需停留1min；最后一次甩净，拍干。（4）加酶反应：除去空白对照孔外，其余每孔加酶结合物一滴，37℃避光反应30min。甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。（5）显色反应：加底物和显色剂各一滴，混匀，37℃避光反应10min。（6）终止反应：加终止液一滴，用酶标仪450nm波长（630nm作为参比波长）读取OD值。（7）对阳性样本和可疑样品重复检测3次。（8） 结果判定方法：Cut-off值（COV）=（阴性对照平均OD值-空白对照）×2.1（阴性对照孔OD值<0.08时按0.08计）；样本OD值≥COV值时，判定为弓形虫抗体阳性；样本OD值≤COV值时，判定为弓形虫抗体阴性。1.4.2 IHA试验按说明书操作（1）配置诊断液：弓形虫IHA诊断试剂按瓶上标示毫升数加灭菌蒸馏水稀释摇匀，1500r/min~2000r/min离心5~10min，弃上清液，加等量的摇匀，置4℃下静置24h后使用。稀释后作为诊断液，4℃左右保存，10d内效价不变。用于检测人和动物血清或滤纸干血滴中的弓形虫抗体，效价不低于1∶1024。
……
……
本文全文刊于本杂志2012年10月刊，可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章，作者：刘 少娟，如若转载，请注明出处：http://zgdwbj.com/archives/10622
