1 材料与方法
1.1 待检血清样品 样品采自龙岩市部分地区的8个规模猪场,共采集血清2862份;其中后备母猪1733份,繁殖母猪790份,后备公猪84份,种公猪107份,仔猪30份,育肥猪118份。血样采用前腔静脉采血,分离血清,当天检测,冷藏保存(2天~8天)备用。 1.2 主要试剂 锐捷猪圆环病毒2-dCap-ELISA检测试剂盒、标准阴阳性对照血清与稀释液均购自瑞普生物。 1.3 设备与仪器 美国Thermo Labsystems Multiskan Mk3酶标仪、德国Eppendorf移液器(50μL和100μL)、一次性微量移液器使用的吸头等。 1.4 检测方法 检测严格按照以下操作步骤进行: 1、取20mL浓缩洗涤液(血清稀释液),用蒸馏水稀释20倍。 2、用血清稀释液在稀释板内将待检血清样本稀释400倍,振荡混匀。 3、取抗原包被板,每个待检样品选取2孔,每孔加入100μL已稀释的待检样品;同时设不稀释的强阳性对照血清孔、弱阳性对照血清孔、阴性对照血清孔,各2孔,每孔100μL。 4、轻轻振匀孔中样品,置37℃ 孵育30分钟。 5、甩掉抗原包被板孔中的溶液,每孔加入200μL~300μL洗涤液,静置1分钟,倒掉洗涤液。重复洗板5次。吸水纸干燥抗原包被板。 6、每孔加入山羊抗猪IgG酶标二抗工作液100μL,置37℃孵育30分钟。 7、洗涤液洗板5次,方法同5。 8、蒸馏水洗板2次,甩干。 9、等体积混合显色A液、显色B液,混匀,每孔100μL,室温避光显色10分钟。 10、每孔加终止液50μL,15分钟内测定结果。 11、在酶标仪上读取样品OD450的光密度值。 1.5 计算方法及判定标准 1、试验成立条件 两孔阴性对照OD450平均值应≤0.25,两孔强阳性对照OD450平均值应≥0.8,两孔弱阳性对照OD450平均值应≥0.5。
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本文全文刊于本杂志2013年2月刊,可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章,作者:刘 少娟,如若转载,请注明出处:http://zgdwbj.com/archives/10564