鲁氏不动杆菌属于不动杆菌属,它广泛分布于自然界,存在于土壤、饮水、污水和食品中,是重要的机会致病菌,常引发败血症,肺炎,心内膜炎等[1],人在医院感染的病例有报道[2],未见猪感染的报道。2012年3月广西北海某猪场20到30日龄的产房仔猪发生以咳嗽为主要症状的疾病,临床采样经实验室诊断为鲁氏不动杆菌感染,经治疗后病情得到控制,现将情况报告如下。
一、流行病学
1.发病情况和临床症状 猪场第8栋产房20到30日龄的48头仔猪食欲不振,身苍白,发病率90%,死亡率5%,部分病猪腹股沟淋巴结肿大且体温升高至40.0℃。 2.病理变化 剖检病猪,发现主要病变有:肺门淋巴结出血,右侧肺尖叶充血出血,左侧隔叶中部充血出血,其他内脏器官无肉眼可见的病理变化。 二、实验室检查 1.猪繁殖呼吸综合征病毒和猪瘟病毒的检测 取病猪肺、淋巴结、脾脏等组织病变部与健康部交界处组织各0.05g于研磨器中研磨,加入灭菌生理盐水1.5mL继续研磨至匀浆,将匀浆转至1.5mL灭菌EP管中,反复冻融3次,8000rpm离心5min,取上清。按武汉科前猪繁殖呼吸综合征病毒RT-PCR检测试剂盒和猪瘟病毒RT-PCR检测试剂盒提取病毒RNA,按以下RT-PCR操作程序进行:RT-PCR反应体系,总体积25μL,RT-PCR反应液(繁殖呼吸综合征病毒或猪瘟病毒)19.5μL, 酶混合液0.5μL,RNA模板5μL;繁殖呼吸综合征病毒RT-PCR反应程序45℃,30mim;94℃,5mim;94℃,30sec;55℃,30sec;72℃,30sec;72℃,10min。猪瘟病毒RT-PCR反应程序45℃,30mim;95℃,3mim,94℃,30sec;60℃,30sec;72℃,25sec;72℃,10min。RT-PCR反应产物经琼脂糖电泳,在凝胶成像系统下未观察到目的条带,即未检测到繁殖呼吸综合征病毒和猪瘟病毒。 2. 细菌分离和培养 无菌采取病死仔猪心血、肝脏、脾脏、肺门淋巴结划线接种普通营养琼脂和鸡鲜血营养琼脂,37℃恒温培养24h,取自肺门淋巴结的在鸡鲜血营养琼脂上有光滑湿润、边缘整齐、隆起的大露滴状菌落,呈白色或淡黄白色。挑取单个菌落涂片,吉姆萨-瑞士法染色、镜检,可见染成紫蓝或紫红色的短粗杆菌,菌体单个、成对或成堆。 3.PCR鉴定和基因测序 按TIANGEN细菌组DNA提取试剂盒提取分离菌的细菌组DNA,用扩增细菌的16S rRNA通用引物16S-1492R/16S-27F进行扩增,将PCR扩增产物电泳,电泳产物经上海英骏生物技术公司测序,将获得的DNA序列在NCBI上进行核酸同源性搜索,结果显示其与鲁氏不动杆菌同源性达100%,因此初步鉴定分离菌为鲁氏不动杆菌。 4.细菌的生化特性 对分离菌进行生化鉴定,根据实验结果查看《伯杰细菌学鉴定手册》第九版,鉴定该细菌为鲁氏不动杆菌,氧化酶阴性,不发酵的革兰氏阴性,严格好氧,不具运动性,触酶阳性。
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本文全文刊于本杂志2013年1月刊,可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章,作者:刘 少娟,如若转载,请注明出处:http://zgdwbj.com/archives/10500