光照对鸡的生产性能有很大的影响[1-2],科学利用光照在养鸡业有很大的潜力,然而由于目前对其影响机制,特别是神经调节机制的研究不够深入,很大程度上限制了养鸡业合理利用光照。 位于鸡中脑背侧部的视顶盖接受90%对侧视网膜节细胞的投射,是非常重要的光信息通路[3]。视顶盖的光信息通路主要从中央灰质层(SGC)投射到同侧丘脑的圆核(Rt),再从圆核投射到同侧的外纹状体(Ect),其中部分SGC先投射到顶盖前下核/顶盖前间下核(SP/IPS),再由此核投射到圆核,构成间接通路[4]。目前对于从SGC到同侧圆核的投射研究比较深入,而对于从SGC到对侧圆核的联系却知之甚少。 辣根过氧化物酶(HRP)是良好的神经示踪剂,在研究神经通路中得到了广泛的应用。麦芽凝集素结合HRP(WGA-HRP)具有更高的敏感性。本研究使用WGA-HRP为示踪剂对鸡脑离顶盖通路光信息通路的对侧联系,即从SGC到对侧圆核的投射进行了观察,同时检测到了两侧圆核间的投射。为进一步阐明光照对鸡生产性能的神经调节机制,为养鸡生产科学利用光照和兽医神经外科学提供一定的资料。
1 材料与方法
1.1 动物 14日龄健康白来航雏鸡58只(Rt-1―Rt-58),购自保定某鸡场。1.2 试剂及仪器 WGA-HRP(日本Toyobo公司)、江湾I型脑立体定位仪(第二军医大学)、CX31型生物显微镜和DP71 数码显微摄影装置(日本Olympus公司)、YD-1900 恒冷箱冷冻切片机(浙江金华市益迪医疗设备厂)。1.3 方法 将雏鸡固定,腹腔注射10倍稀释后的速眠新II型注射液(0.5mL/只)进行麻醉,置于脑立体定位仪调整好,根据Kuenzel和Masson’s所著鸡脑立体定位图谱[5],利用自动微量注射驱动仪器将0.025μl的3%WGA-HRP缓慢注入雏鸡左侧中脑圆核内。存活30h后用1%多聚甲醛1.25%戊二醛0.1mol磷酸缓冲液(pH7.4, 4℃)、10%蔗糖0.1mol磷酸缓冲液(pH7.4, 4℃)灌流固定。取脑,置入30%蔗糖0.1mol磷酸缓冲液中(pH7.4, 4℃,过夜),至鸡脑沉底后用恒冷箱冷冻切片机制作冰冻切片,厚度50μm,隔3张取3张收集于0.1molPB(pH7.3,4℃)中。采用TMB法进行呈色反应,并用中性红溶液复染以显示脑组织结构。将切片展平贴于明胶处理过的载玻片上, 置于含干燥剂的盒内4℃避光过夜至干燥,切片盒于室温避光放置1 h后无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。1.4 结果观察 CX31型生物显微镜观察鸡脑离顶盖通路中标记神经细胞体和神经纤维形态及分布规律,Olympus DP71显微照相系统显微摄影。
2 结果
将WGA-HRP注入圆核后,在同侧SGC层和SP/IPS见有大量HRP标记神经细胞。标记神经元胞体呈三角形、纺锤形或多边形。此外,在对侧视顶盖SGC层、SP/IPS核和圆核观察到一定数量标记细胞,但数量较少,分布范围较小。2.1对侧SGC同圆核之间的联系 对侧视顶盖SGC层标记细胞不如同侧的多,但是相对于对侧Rt核和SP/IPS核,数量较多,而神经纤维密度较低。
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本文全文刊于本杂志2012年6月刊,可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章,作者:刘 少娟,如若转载,请注明出处:http://zgdwbj.com/archives/10487