云南奶水牛产业是畜牧业的重要组成部分，极具特色。奶水牛具有抗病力强，耐粗饲，耐湿热，乳、肉、役兼用等特点。奶水牛乳蛋白、乳脂等重要营养成分显著高于其他奶畜，被视为“乳中珍品”，在国内外市场上处于供不应求的状态。发展奶水牛养殖已成为我省部分地区调整、优化畜牧业产业结构和增加农民收入的有效途径。 结核病是由结核分枝杆菌引起的一种重要人畜共患病，严重威胁奶牛产业发展和人类的健康，具有重要的公共卫生意义，是我国重点防控的主要人畜共患病病种之一。目前，我国对牛结核病活体检测是依据国标动物结核病诊断技术：PPD皮内变态反应试验。该方法具有成本低、适用范围广的特点，适合基层牛场现场检测及普查，但其敏感性和特异性均较低，假阳性率高。奶水牛具有皮肤厚度大、富有弹性，敏感性高等特点，检测假阳性概率高于黄牛。 随着免疫机理的深入研究，有学者建立了抗γ-干扰素ELISA诊断法检测牛结核病，降低假阳性率，其敏感性和特异性均达到95%以上[1,2]。该方法已被新西兰、美国证实了诊断活体牛结核病的可靠性，并批准为正式试验[3-5]。该法虽准确可靠，但检测成本也很高，且需专门仪器，采集样品要求在30小时内进行试验，不适宜现场检测及普查。 将上述两种方法结合应用于奶水牛结核病检测，首先应用PPD试验进行检测，阴性反应个体视为健康牛，出现阳性或疑似反应的个体，应用抗γ-干扰素EILSA法进行复检。根据云南省现代农业奶牛产业技术体系建设项目奶水牛结核病监测和净化的需要，我们应用上述两种方法检测活体奶水牛，结合对受检测奶水牛健康状况的观察，评估该两种方法的检测效果，为我国‘十二五’制（修）订动物结核病诊断技术国家标准提供技术依据。
1 材料与方法
1.1 奶水牛和抗凝全血 供试验304头奶水牛为我省某市4个乡镇8个奶水牛养殖小区（场）和2个农户饲养的奶水牛，全群牛以个体为单位用于PPD试验。采集PPD试验检出阳性或者可疑奶水牛抗凝全血样品55份（其中1份为阴性样品，因同舍牛无耳标无法辨认而采集），应用抗γ-干扰素ELISA方法进行复检。1.2 试剂 国内某企业生产商品化牛型提纯结核菌素(PPD)试剂，批号：201007；IFN-γ ELISA试剂盒由澳大利亚AgriQuality公司生产，批号：63329/63320/63326。1.3 检测方法1.3.1 PPD皮内变态反应试验 将牛只编号后在颈侧中部上三分之一处剪毛，直径约10cm。用卡尺测量无明显病变的术部中央皮皱厚度并记录。不论牛只大小，均经皮内注射0.1mL（含2000IU）PPD试剂。皮内注射后72小时，观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，以卡尺测量皮皱厚度并记录。对阴性和疑似反应牛只，分别于注射后96小时和120小时各观察一次。 结果判定：阳性反应，局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0mm；疑似反应，局部炎性反应，皮厚差大于或等于2.0mm，小于4.0mm；阴性反应，无炎性反应，皮厚差在2.0mm以下。1.3.2 抗γ-干扰素EILSA法检测 抗γ-干扰素EILSA检测按试剂盒说明书进行，设置阳性对照和阴性对照，试验在云南省现代农业奶牛产业技术体系奶牛疾病控制功能研究室（云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室）完成。
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本文全文刊于本杂志2013年3月刊，可从知网下载或向本刊订阅。
原创文章，作者：刘 少娟，如若转载，请注明出处：http://zgdwbj.com/archives/10077
